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技術文章

FISH(熒光原位雜交)簡介

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FISH(熒光原位雜交)

熒光原位雜交用于通過互補探針序列的雜交來顯示確定的核酸序列。FISH 有很多應用,從基本的基因定位到染色體畸變的診斷(細胞遺傳學)。多色 FISH 圖像分析需要使用單獨的濾光片激發(fā)塊(立方體)或激發(fā)濾光片轉輪結合多波段二向色鏡和發(fā)射濾光片來隔離各種信號。

熒光免疫原位雜交(FISH)和 多路復用(Densely Multiplexed)成像的串色

當同時使用具有多個密集光譜的熒光染料時,區(qū)分熒光標記的能力決定了檢測結果的速度和準確性。在進行熒光免疫原位雜交 (FISH)測量時,這種密集的圖像復用特別重要。因此,減少串色(即來自不希望的熒光染料的信號相對于所需熒光染料的信號影 響)至關重要。下表量化了使用特定的
BrightLine 熒光免疫原位雜交(FISH)濾光片組時,相鄰熒光染料之間的串擾值。該串擾值 決定于典型的歸一化熒光染料光譜、濾光片的設計光譜和強金屬鹵化物燈光譜的重疊。

這些結果已經針對每個給定的濾光片組進行了標準化,因此用戶應該讀取每行(而不是每列)的值以查看給定濾光片組的預期串擾值。

例如,當使用 SpectrumGold™ 濾光片組對標記有 SpectrumGreen™、SpectrumGold™ 和 SpectrumRed™ 熒光染料的樣品進行 成像時,不需要的 SpectrumGreen 信號將小于所需要的 SpectrumGold 信號的 2%,并且 SpectrumRed 信號將小于1%。

好的濾光片會帶來哪些不同 ?

BrightLine“不易燒熔”濾光片在多年的使用中,在研究和臨床領域都得到了廣泛的測試。BrightLine 熒光免疫原位雜交 FISH 濾光片組也進行了嚴格的獨立測試。結果顯示:使用 BrightLine 濾光片組進行熒光免疫原位雜交 FISH 分析時,無論您是查找 和分析中期分裂,還是通過點計數對細胞進行評分,都可以提高分析的速度和準確性。

熒光濾光片簡介

一個分子吸收其吸收譜帶波長范圍(即吸收光譜)內的光,然后幾乎瞬間發(fā)出較長的、位于其發(fā)射譜帶波長范圍(即發(fā)射光譜)內的光,此時,就會發(fā)生光學熒光。為了達到分析的目的,強的熒光分子,亦被稱為熒光團、熒光染料,專門用于連接到生物分子或其他感興趣的目標,用于鑒定、定量、甚至實時觀察物質的生物和化學活性。熒光染料因為具有*的靈敏度、高特異性和簡單性,被廣泛應用于生物技術和分析檢測中。大多數熒光儀器,包括熒光顯微鏡,都是基于光學濾光片。

一個典型的系統(tǒng)有三個基本的濾光片組成:激發(fā)濾光片(或吸收濾光片),二向色鏡分束鏡(或二向分色鏡)和發(fā)射濾光片(或阻擋濾光片)。激發(fā)濾光片通常是一個帶通濾光片,它只透過熒光染料的吸收波長,從而最大限度地減少熒光的其他來源的激發(fā)光和阻擋熒光發(fā)射帶內的激發(fā)光。二向色鏡分束鏡是一種邊緣濾光片,用于斜角入射 (通常是 45 °),以有效地反射激發(fā)波段的光和透射發(fā)射波段的光。Semrock 發(fā)射濾光片通常是一個帶通濾光片,僅透過熒光染料的發(fā)射波長,并阻擋這個波段之外的所有不需要的光 - 尤其是激發(fā)光。通過濾光片阻擋不需要的激發(fā)能量(包括紫外和紅外)或樣品和系統(tǒng)的自發(fā)熒光,就可以得到具有黑暗背景的熒光圖像。

我們可以通過選擇適當的光學濾光片,組成一個濾光片組,用于觀察熒光或者對熒光進行成像,這樣就可以達到使一個給定的熒光染料可視化的目的。因為不同熒光染料的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜不同,濾光片組需要優(yōu)化,才可以用于不同熒光染料的同時成像。在不同的實驗條件下使用同一個熒光染料時,濾光片組也需要優(yōu)化。

 

 

 

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